서주희는 연극 무대에서 깊이 있는 연기로 정평이 난 배우다. 중앙대학교 연극영화학과를 졸업하고 1989년 KBS공채 13기 탤런트로 출발한 뒤, 1992년부터 본격적으로 연극 배우로 활동하며 서울시립극단 창단 멤버로도 활약했다. 작품 선정이 까다롭기로 유명하며 마음에 드는 작품이 아니면 나서지 않아 경력에 비해 출연작이 많지 않지만, 그 대신 각 작품에서 깊이 있는 몰입으로 호평받아왔다. 특히 셰익스피어의 고전을 각색한 <레이디 맥베스>에서 주인공 맥베스 부인을 반복해서 맡으며 "빙의됐다"는 평가를 받을 만큼 깊은 심리 연기를 선보였고, 1999년 서울연극제에서 여자 연기상을 수상했다. 영화와 드라마에도 출연하며 다양한 무대에서 활동해온 뮤지컬·연극배우로, 세심한 캐릭터 해석과 진정성 있는 연기로 관객과 평단의 신뢰를 받고 있다. 2019년 우상에서 동숙 역을 맡았다. 2018년 숨바꼭질에서 도현숙 역을 맡았다. 2016년 시그널에서 차수현의 엄마 역을 맡았다.