정서윤은 영화를 중심으로 활동하는 배우다. 멜로와 드라마 장르에서 다양한 캐릭터를 소화하며 활동해 왔다. 자연스러운 감정 표현과 현실감 있는 연기로 작품 속 인물의 심리를 섬세하게 그려내며 필모그래피를 쌓았다. 영화 외출을 통해 스크린 활동을 시작한 뒤 누나 친구, 여자전쟁: 비열한 거래 등에 출연하며 얼굴을 알렸다. 특히 여자전쟁: 비열한 거래에서는 사랑하는 남편의 시력을 되찾기 위해 모든 것을 감수하는 은혜 역을 맡아 파격적인 연기를 선보였다. 이후 신앙 영화 일사각오에도 출연하며 장르를 넘나드는 연기 활동을 이어갔다. 2016년 일사각오에서 오정모 역을 맡았다. 2016년 누나 친구에서 박수진 역을 맡았다. 2015년 여자전쟁: 비열한 거래에서 미소 역을 맡았다.